体育彩票走势图排五
網站地圖 原創論文網,覆蓋經濟,法律,醫學,建筑,藝術等800余專業,提供60萬篇論文資料免費參考
主要服務:論文發表、論文修改服務,覆蓋專業有:經濟、法律、體育、建筑、土木、管理、英語、藝術、計算機、生物、通訊、社會、文學、農業、企業

雞白痢沙門氏菌的的分離和藥敏試驗

來源:原創論文網 添加時間:2019-10-10

  摘    要: 本研究采集了某雞場疑似感染雞白痢的病死雞組織,進行了沙門氏菌的分離、鑒定,以及對10種常見抗生素的藥物敏感性試驗。結果顯示:分離株均為雞白痢沙門氏菌,對阿米卡星(0%)、慶大霉素(0%)、頭孢噻肟(3.70%)的耐藥率較低,對鏈霉素(88.89%)、四環素(62.96%)、阿莫西林(51.85%)的耐藥率較高,且分離株至少可對1種藥物產生耐藥性,至多可對5種藥物產生耐藥性,70.37%的菌株可耐3種以上藥物,其中耐3種藥物的菌株數量最多(48.15%)。該研究結果可對臨床合理用藥提供指導,也為該地區雞白痢的耐藥性監測提供依據。

  關鍵詞: 雞白痢沙門氏菌; 分離; 鑒定; 耐藥性;

  Abstract: The isolates of Salmonella Pullorum were isolated and identified from the suspect samples of the illness or dead chickens in a chicken farm, and their antimicrobial resistances to 10 common antibiotics were analysed by drug sensitivity test. The results showed that all the isolates were Salmonella Pullorum. The rates of antimicrobial resistance to amikacin (0%), gentamicin (0%) and cefotaxime (3.70%) were lower, yet the ones to streptomycin (88.89%), tetracycline (62.96%) and amoxicillin (51.85%) were higher. The Salmonella Pullorum isolates were resistant to 1 antibiotic at least, and 5 antibiotics at most. 70.37% isolates were resistant to 3 or more antibiotics, and the proportion of isolates resistant to 3 antibiotics was the highest (48.15%). The results of this study can provide guidance for rational drug use in clinic and a basis for monitoring the resistance of Salmonella Pullorum in this area.

  Keyword: Salmonella Pullorum; isolation; identification; antimicrobial resistance;

  雞白痢沙門氏菌(Salmonella Pullorum)為腸桿菌科沙門氏菌屬成員,是一類在雞場中較為常見的重要病原菌[1,2],可引起雛雞的下痢、急性敗血癥等,死亡率較高,成年雞則主要呈現慢性感染或隱形感染,可長期帶毒且經卵垂直傳播,給雞場帶來了巨大的經濟損失[3,4,5]。目前使用抗生素進行治療仍是防治雞白痢的重要措施之一,但由于抗生素的長期使用甚至是不合理使用,使得沙門氏菌產生了廣泛而嚴重的耐藥性[6,7,8,9],因此加強雞場中病原菌的耐藥性監測對于細菌病的防治至關重要。

  本研究采集某雞場疑似感染雞白痢的病死雞組織,進行沙門氏菌的分離、鑒定及藥物敏感性試驗,根據藥敏試驗結果,為該雞場合理用藥提供指導,也為該地區雞白痢的綜合防控及耐藥性監測提供依據。

  1 、材料與方法

  1.1 、樣品采集

  選取某雞場臨床癥狀與病理變化疑似雞白痢的病死雞32 只,采集病死雞的肝臟與心臟等組織作為待檢病料。
 

雞白痢沙門氏菌的的分離和藥敏試驗
 

  1.2、 試劑

  麥康凱瓊脂、LB培養基、革蘭氏染色試劑盒等購自青島海博生物技術有限公司。細菌微量生化反應管(葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露醇、衛矛醇、吲哚、硫化氫、枸櫞酸鹽)及藥敏紙片(阿莫西林、恩諾沙星、環丙沙星、慶大霉素、阿米卡星、鏈霉素、頭孢噻肟、頭孢唑林、強力霉素、四環素)購自杭州天和微生物試劑有限公司。DL2000 DNA Marker、2×Taq PCR Master Mix購自寶生物工程(大連)有限公司。

  1.3、 細菌的分離培養

  無菌采集病死雞的肝臟、心臟等組織樣品接種于麥康凱瓊脂平板上,37 ℃培養18~24 h,選取單個可疑菌落按常規作平板反復劃線獲得純培養,挑取典型純培養菌落置于LB培養基中振搖進行增菌培養,用于后續鑒定。

  1.4 、分離株的染色鏡檢

  挑取純培養的可疑菌落制成涂片,按照革蘭氏染色試劑盒說明書進行染色、鏡檢,觀察菌株形態。

  1.5 、分離株的生化試驗

  按照細菌微量生化反應管說明書,將純培養菌株分別接種至各生化管中,經37 ℃培養24~48 h觀察結果。

  1.6 、雞白痢沙門氏菌的PCR鑒定

  根據參考文獻[10],合成雞白痢沙門氏菌的血清型特異性PCR檢測引物,上游引物:5’- CGATAATGGCAACCGCACTG -3’,下游引物:5’- TGATGTCTGCCCCTTTCGAC -3’,擴增產物大小為356bp。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

  取200 μL待檢菌液采用煮沸裂解法提取基因組DNA,以此為模板進行PCR鑒定,同時以滅菌去離子水為陰性對照。PCR反應體系為25 μL,其中各組分為:模板1 μL,2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL,加滅菌去離子水補足至25 μL。PCR反應程序為:94 ℃預變性5 min;94 ℃變性30 s、55 ℃退火30 s、72 ℃延伸30 s,30個循環;72 ℃延伸7 min。根據1%的瓊脂糖凝膠電泳結果,判定分離株血清型。

  1.7 、分離株的藥敏試驗

  以大腸埃希氏菌ATCC25922為藥敏質控菌株,采用K-B紙片擴散法進行分離株的藥敏試驗[11]。將分離株24 h純培養菌液用無菌生理鹽水配置成0.5麥氏單位,均勻涂布于LB瓊脂平板上,貼上藥敏紙片置于37 ℃培養18~24 h,測量抑菌圈直徑,判定分離株對10種常用抗生素的耐藥情況[12]。

  2 、結果與討論

  2.1、 菌株的初步分離與鏡檢

  病死雞組織中分離的可疑菌株在麥康凱瓊脂平板上形成圓形、光滑、白色或無色的細小菌落,將菌落反復純化培養,共獲得27株可疑菌株培養物,經革蘭氏染色鏡檢均為短小、兩頭鈍圓的革蘭氏陰性桿菌,多為分散存在,符合沙門氏菌的菌落特征。

  2.2、 生化試驗

  將27株純培養的可疑菌株接種至微量生化反應管中,37 ℃培養24~48 h后,分離株的生化試驗結果一致(表1),均能發酵葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露醇、衛矛醇,不發酵乳糖、蔗糖、麥芽糖,不產生吲哚、硫化氫,不利用枸櫞酸鹽,符合雞白痢沙門氏菌的生化特性。

  表1分離株的生化特性
表1分離株的生化特性

  注:+表示反應為陽性,-表示反應為陰性“+” indicates positive reaction; “-” indicates negative reaction

  2.3、 菌株血清型的PCR鑒定

  用雞白痢沙門氏菌特異性引物進行PCR檢測,27株可疑菌株均可擴增出356 bp的目的條帶(圖1),證明分離所得的菌株均為雞白痢沙門氏菌。

  圖1部分分離株PCR鑒定結果
圖1部分分離株PCR鑒定結果

  Fig.1 Identification results of partial isolates by PCR

  M:DNA 分子量標準;1:陰性對照;2-9:部分分離菌株M: DL2000 DNA Marker; 1: Negative control; 2-9: Some isolates

  2.4、 藥敏試驗

  對27 株雞白痢沙門氏菌分離株進行了10 種常用抗生素的敏感性試驗,結果顯示:分離株除了對阿米卡星和慶大霉素的敏感率達100%以外,對于其他8 種藥物均有不同程度的耐藥情況,耐藥率由高到低分別為:鏈霉素(88.89%)、四環素(62.96%)、阿莫西林(51.85%)、強力霉素(37.04%)、頭孢唑林(29.63%)、恩諾沙星(14.81%)、環丙沙星(7.41%)、頭孢噻肟(3.70%)(表2)。

  表2雞白痢沙門氏菌分離株的藥敏試驗結果
表2雞白痢沙門氏菌分離株的藥敏試驗結果

  沙門氏菌分離株的多重耐藥情況也十分嚴重,所有分離株至少可耐一種藥物,70.37%(19/27)的菌株可耐三種以上藥物,其中三耐菌株數量最多,達48.15%(13/27),而7.41%(2/27)的菌株最多可耐五種藥物(圖2)。這些嚴重的多重耐藥情況將造成疾病防治難度的增大。

  圖2雞白痢沙門氏菌分離株的多重耐藥情況
圖2雞白痢沙門氏菌分離株的多重耐藥情況

  Fig.2 Multi-drug resistance of Salmonella Pullorum isolates

  根據本研究中的藥敏試驗結果,建議該雞場選取阿米卡星、慶大霉素、頭孢噻肟等高敏藥物進行雞白痢的防治工作,并在治療過程中采用交叉用藥、輪換用藥等方式,以達到較好的療效,降低耐藥菌株產生的可能性[13]。同時,加強雞場的飼養管理水平,建立生物安全體系,定期對環境及器械等進行消毒,從而消除致病菌的增殖與傳播,保證雞群的健康養殖。

  參考文獻

  [1] 耿世忠, 郭榮顯, 焦新安, 等. 雞白痢沙門氏菌研究進展[J]. 中國家禽, 2014, 36(5): 34-37.
  [2] 曾曉芳. 畜產品屮沙門氏菌污染的檢測與控制[J]. 四川畜牧獸醫, 2003, 30(4): 28-29.
  [3] 劉喆, 張書蕭, 王少輝, 等. 沙門氏菌的檢測技術進展[J]. 中國動物傳染病學報, 2012, 20(2): 81-86.
  [4] 李成忠, 王宏寧, 黃勇, 等. 多重耐藥雞致病性沙門氏菌I類整合子的檢測技術[J]. 中國畜牧獸醫, 2012, 1: 172-177.
  [5] 鄧文超. 阜新某雞場雞白痢沙門氏菌的分離鑒定與耐藥分子機制研究[J]. 現代畜牧獸醫, 2017, 4: 34-40.
  [6] 王俊紅, 王艷明. 沙門氏菌的致病性和耐藥性研究進展[J]. 畜牧市場, 2008, 4: 43-46.
  [7] 潘志明, 焦新安, 劉學賢, 等. 雞白痢沙門氏菌耐藥性的變化趨勢[J]. 中國預防獸醫學報, 1999, 21(4): 305-307.
  [8] Ji H K, Jong H P, Lee Y J, et al. Molecular and virulence characteristics of multi-drug resistant Salmonella Enteritis’s strains isolated from poultry[J]. Vet. J, 2011, 189(3): 306-311.
  [9] Zhao S, Mcdermott P F, White D G. Characterization of multidrug resistant Salmonella recovered from diseased animals[J]. Veterinary Microbiology, 2007, 23: 122-132.
  [10] 張童利, 王曼宇, 曹俊, 等. 雞白痢沙門氏菌與其他致病性沙門氏菌的血清型特異性PCR鑒別檢測方法的建立[J]. 中國預防獸醫學報, 2017, 39(3): 215-219.
  [11] 王曉泉, 焦新安, 劉曉文, 等. 江蘇部分地區食源性和人源沙門氏菌的多重耐藥性研究[J]. 微生物學報, 2007, 4, 47(2): 221-227.
  [12] 陸彥, 呂安, 趙紅玉, 等. 雞源腸炎沙門氏菌對抗菌藥物的耐藥性分析[J]. 中國人獸共患病學報, 2014, 1: 17-22.
  [13] 蔣紅霞, 曾振靈. 細菌耐藥性機制及耐藥性控制對策[J]. 動物醫學進展, 2001, 22(4): 4-7.

重要提示:轉載本站信息須注明來源:原創論文網,具體權責及聲明請參閱網站聲明。
閱讀提示:請自行判斷信息的真實性及觀點的正誤,本站概不負責。
体育彩票走势图排五 花卉市场卖花赚钱嘛 网赌3000赢100多万 辽宁快乐12走势图及开奖结果 支付宝理赔赚钱 118篮球比分直播 重庆时时开奖结果记录 11选5走势图安徽时时网 捕鱼棋牌送分可退现金 3d稳赚法 炸金花做牌技巧视频 澳洲pk10计划在线计划 福彩3d三天计划 转发文章赚钱平台大全 11选5中大奖故事 一天稳赚100的项目 易发棋牌中心下载